ДИАХИМ-НАБОР ДЛЯ ОКРАСКИ ПО ГРАМУ

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ:

Предметное стекло перед исследованием должно быть тщательно вымыто и обезжирено смесью для обезжиривания предметных стекол пр-ва «АБРИС+».

Приготовление рабочего раствора фуксина Циля

Перед использованием фуксин Циля разводят в 10 раз дистиллированной водой. (Из расчета – к 1 мл фуксина добавляют 9 мл дистиллированной воды).

Приготовление мазков:

На обезжиренное предметное стекло в каплю водопроводной воды внести бактериологической петлей небольшую часть материала с посева (чашка Петри или пробирка) соответствующей микробной тест-культуры и равномерно распределить материал в воде. С обратной стороны предметного стекла обозначить границы мазка с помощью маркера. Просушить мазок на воздухе при комнатной температуре.

Фиксация мазков:

Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова , жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10—15 минут и затем высушивают на воздухе, либо полученные мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 70°С) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх в течение 5 секунд.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

1.     Поместить на мазок полоску фильтровальной бумаги и нанести на фиксированный мазок несколько капель (3-4 капли) Реагента 1 так, чтобы раствор полностью покрыл фильтровальную бумагу и выдержать 2-3 минуты;
2.     Слить краску, удалить фильтровальную бумагу и сполоснуть мазок проточной водой в течение 30 секунд;
3.     Нанести на мазок несколько капель (3-4 капли) Реагента 2 на 1-2 минуты;
4.     Смыть краситель водопроводной водой в течение 10 секунд;
5.     Поместить мазок в ёмкость с этиловым спиртом 96°, опуская и извлекая его до тех пор, пока мазок не обесцветится (30-60 секунд);
6.     Промыть мазок в проточной воде в течение 1-2 минут;
7.     Нанести на мазок несколько капель (3-4 капли) Реагента 3 на 1-3 минуты;
8.     Промыть стекла в проточной воде 1 минуту;
9.     Высушить;
10.      Микроскопировать с иммерсией в световом микроскопе (увеличение х100, окуляр х10).

Результат окраски:

Для кат.№№ 440Ф, 440С: грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовый цвет (темно-синий), а грамотрицательные - розово-красный, красный или коричневый.

Для кат.№ 440К: ядра трихомонад – синие, сине-фиолетовые, цитоплазма трихомонад – желтая, оранжевая. Грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовый цвет (темно-синий), а грамотрицательные - розово-красный, красный или коричневый.