8 800 333 73 24БЕСПЛАТНО ПО РОССИИ

Цитохимические исследования эритроцитов

Зенина М.Н., Черныш Н.Ю.
Ассистент кафедры КЛД СЗГМУ им.И.И.Мечникова
Доцент кафедры лабораторной медицины и генетики НМИЦ им.В.А.Алмазова

Цитохимические исследования, используемые в лабораторной практике, отличаются простотой, не требуют специального оборудования и дают представление о
количестве и варианте расположения исследуемого вещества в клетках. В клетках эритроидного ростка цитохимические реакции проводят с целью выявления различных внутриклеточных включений, наличия разных форм гемоглобина, ферментных нарушений. Наиболее часто это необходимо при диагностике сидеробластных анемий. Причины сидеробластных анемий можно разделить на три группы: врожденная сидеробластная анемия, приобретенная клональная анемия и приобретенная обратимая сидеробластная анемия.

Наследственная, или врожденная сидеробластная анемия может быть Х-сцепленной, или аутосомной. Приобретенная, или вторичная, сидеробластная анемия развивается после рождения и делится в соответствии с причиной возникновения.

Наследственные формы сидеробластной анемии встречаются реже, чем приобретенные, и обычно развиваются в младенчестве или раннем детстве. Наиболее распространенная врожденная сидеробластная анемия является формой, сцепленной с Х-хромосомой, вызванной герминативным мутациями гена ALAS2 (пять'-аминолевулинатсинтазы 2), участвующего в биосинтезе гема. Витамин B6 (пиридоксин) является основным кофактором фермента, продуцируемого ALAS2, таким образом, пациенты могут реагировать на введение пиридоксина. Примерно одна треть пациентов - женщины.

Многочисленные другие сцепленные с Х-хромосомой, аутосомные и митохондриальные формы были отождествлены с мутациями в генах, участвующих в синтезе гема, или других митохондриальных ферментативных путей. Аутосомно-рецессивная сидеробластная анемия включает мутации в гене SLC2пятьA38. Функция этого белка до конца не изучена, но он участвует в митохондриальном транспорте глицина. Глицин является субстратом для ALAS2 и необходим для синтеза гема. Аутосомно-рецессивная форма, как правило, имеет тяжелое течение. В редких случаях сидеробластная анемия может быть частью врожденного синдрома и сопровождаться атаксией, миопатией и недостаточностью поджелудочной железы.

Причины приобретенной обратимой сидеробластной анемии включают чрезмерное употребление алкоголя (наиболее распространенная причина), дефицит пиридоксина, отравление свинцом и дефицит меди. Избыток цинка может косвенно вызывать сидеробластную анемию уменьшая абсорбцию и увеличивая выведение меди. Противомикробные препараты, такие как изониазид (препятствующий метаболизму пиридоксина), левомицетин (ингибирующий синтез белка митохондриальной мембраны и ухудшающий митохондриальное дыхание), циклосерин и линезолид также могут привести к сидеробластной анемии.

Приобретенные клональные сидеробластные анемии подпадают под широкую категорию миелодиспластических синдромов (МДС). Существуют три формы, которые включают миелодиспластический синдром с кольцевыми сидеробластами (МДС КС), подразделяющийся на МДС КС с однолинейной и МДС КС с мультилинейной дисплазией и одним из вариантов группы миелодиспластичесих /миелопролиферативных неоплазии - МДС/МПН с кольцевыми сидеробластами и тромбоцитозом.

Терминология «миелодиспластический» синдром дает возможность подчеркнуть принципиальную морфологическую находку, без которой не может быть корректной диагностики, но это не исключает вероятность обнаружения диспластических изменений при других заболеваниях или, например, после цитостатической терапии.

Кольцевые сидеробласты можно обнаружить у больных хроническими миелопролиферативными заболеваниями. Диагностика МДС начинается с обнаружения и количественного подсчета числа клеток с признаками дисплазии. Кольцевые сидеробласты – один из признаков дизэритропоэза. Принимаются во внимание именно кольцевые сидеробласты. Кольцевые сидеробласты – эритроидные предшественники, в которых при окраске по Перлсу (Prussian blue, Perls reaction) обнаруживается железосодержащие гранулы, охватывающих не менее трети части поверхности ядра.

Рабочая группа по морфологии МДС (IWGM-MDS) определила, что кольцевые сидеробласты должны иметь не менее пять гранул в перинуклеарном пространстве и что эти гранулы могут либо окружать все ядро, локализуясь на участках перинуклеарной области, либо покрывать по меньшей мере одну треть ядра.

Рабочая группа определила три типа сидеробластов: сидеробласты типа 1 при которых менее пять сидеротических гранул в цитоплазме, сидеробласты типа 2, когда пять или более сидеротических гранул, но не в перинуклеарном распределении и тип 3 или кольцевые сидеробласты, когда пять или более гранул в перинуклеарном положении, окружающих ядро или охватывающих, по меньшей мере, одну треть ядерной окружности. Только сидеробласты типа 3 могут квалифицироваться как кольцевые сидеробласты,


Рисунок 1. Расположение гранул железа в эритробластах (схема).

Зенина 3.jpg

Группа рекомендует, чтобы при подсчете кольцевых сидеробластов были подсчитаны все стадии предшественников эритроидного ростка и включали не менее 100 эритроидных предшественников. Определение кольцевого сидеробласта, предложенное IWGMDS, было включено в классификацию ВОЗ 2008 года опухолей гемопоэтических и лимфоидных тканей. Для миелодиспластических синдромов диагностически значимым является обнаружение кольцевых сидеробластов в костном мозге в 15% и более клеток эритроидного ростка без увеличения процента бластных клеток в периферической крови и костном мозге. В некоторых случаях обнаружение меньшего число кольцевых сидеробластов, при наличии мутации гена SF3B1, позволяет поставить диагноз МДС КС (МДС с кольцевыми сидеробластами).
Зенина 11.jpg

Рисунок 2. Кольцевые сидеробласты (цитохимическое исследование эритроцитов), ув.х100.

Когда же назначается цитохимическое исследование клеток эритроидного ростка? При диагностике анемических состояний, длительно рефрактерных к лечению, подозрении на миелодиспластический синдром, диференциальной диагностике анемий. Зачастую в этих случаях проводят расширенный поиск, включающий, в том числе, исследование костного мозга. В том случае, когда врач-морфолог констатирует расширенный эритроидный росток и выраженные диспластические изменения (наличие мегалобластоидных, т.е. морфологически схожих с мегалобластами, но являющихся проявлением диспластических изменений клеток в результате дизэритропоэза) целесообразно проведение окраски по Перлсу для выявления сидеробластов. Прогноз пациентов с МДС КС может отличаться от такового у пациентов с другими вариантами МДС. В последнее время появились препараты для таргетной терапии МДС КС, что в значительной мере определило необходимость правильной и унифицированной реакции для выявления сидеробластов.

В лабораторной практике наиболее удобно использовать коммерческие наборы для цитохимических исследований, зарегистрированные на территории Российской Федерации и разрешенные к использованию. Хорошо зарекомендовала себя продукция для цитохимии ЦитоСтейн производства «Абрис+» (г.Санкт-Петербург), в составе которой предложен набор для определения сидеробластов ЦитоСтейн-С [Рисунок 3].



Зенина 2.jpgЗенина 4.jpg

Рисунок 3. Набор для определения сидеробластов.

В состав набора входит фиксатор, калий железосинеродистый, хлористоводородная кислота и сафранин. Перед началом работы по прилагаемой инструкции готовятся рабочие растворы. В основе реакции лежит образование ферриферроцианида при взаимодействии ионов трёхвалентного железа с ферроцианидом в кислой среде, что проявляется в виде образования синего осадка ферриферроцианида. Железо, находящееся в перинуклеарных митохондриях, представлено в форме ферритина. В результате реакции выпадает нерастворимый комплекс в виде гранул бирюзово-синего цвета в клетках крови, костного мозга или тканей, там, где локализовано свободное железо: 4 Fe+3 + 3К4Fe(CN)6 ----> Fe4[Fe(CN)6]3 + 12 K+.

Очень удобно, что весь ход реакции подробно изложен, что значительно облегчает работу. Кроме того, использование таких реагентов позволяет унифицировать исследования, что очень важно при выявлении различных сидеробластных анемий и их дифференциальной диагностике.

Оценку проводят под микроскопом проходящего света, объектив х100, масляная иммерсия. Для подсчета сидероцитов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом, оценивая не менее 1000 эритроцитов и отмечая количество клеток, содержащих гранулы железа. Их выражают в % от просчитанных эритроцитов. Нормальные значения содержания сидероцитов в периферической крови у взрослых 0 – 0,3%, у новорожденных 0,3 – 1,7%.

При анализе костного мозга подсчитывают сто эритробластов, среди которых выделяют клетки без включения железа, с единичными гранулами и кольцевые формы. В заключении обозначают процентное отношение всех положительных эритроидных клеток и количество кольцевых форм. Увеличение сидеробластов наблюдается при гемолитических, мегалобластных анемиях, после спленэктомии, анемиях, связанных с нарушением синтеза и утилизации порфиринов (как наследственных, так и приобретенные). Особое значение подсчет количества сидеробластов имеет при миелодиспластических синдромах. Снижение сидеробластов имеется при железодефицитной анемии.

Таким образом, цитохимическое исследование клеток эритроидного ростка широко используется в дифференциальной диагностике различных гематологических и онкогематологических заболеваний. Возможность использования для этого проверенных, прошедших регистрацию наборов, прошедших многоуровневый контроль качества при производстве, исключает возможность ошибки, которые встречаются зачастую при использовании реагентов случайных производителей и дающих ложноотрицательные результаты.

Статья опубликована в журнале "Поликлиника. Лаборатория ЛПУ", 2022

Возврат к списку


ВОПРОСЫ-ОТВЕТЫ

Вопрос:
Можно ли разводить краситель по Романовскому 1:5 ?

Подробнее

ВИДЕОМАТЕРИАЛЫ

Окраска мазков крови по Паппенгейму-Крюкову (вариация метода окраски по Романовскому):

ОТЗЫВЫ

Отзыв о работе автомата окраски мазков крови "АвтоОМК", производства ЗАО "Солар", с использованием наборов красителей производства ООО НПФ "АБРИС+"

Читать далее


НАШИ ПАРТНЕРЫ:

Войти в систему
horse xvideo youjizz.sex imdian fuck videos www desiclips com goindian.net xxxvedioes tamil hidden cam porn desisexy.org free sex film mp3juices youporner.cc sex karne ka tarika video alohatubes desixxxtube.info brothel porn
priyanka chopra nude pics onlyindianx.cc xnxn hd فلام0سكس geficktporno.com لبن زب sexarp arabwifeporn.com سكس كلسيكي tamamo no mae doujin realhentai.net maho nishizumi hentai سكس مغرى roughtube.org بنت جامده
www.sex viedo pakistanipornx.net malayalam sex pic kochi girl pornview.org friend sex video hot jokes tubepatrol.cc nagina songs download up desi sex dirtyindianx.cc sonakshi sinha hot scene gujarati sex motherless.pro lund bhosda