ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-ПАС Определение гликогена в лейкоцитах

Предыдущий товар

ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-НЭ Определение неспецифической эстеразы в лейкоцитах

Следующий товар

ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-С Определение сидеробластов и сидероцитов

ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-ПАС Набор реагентов для цитохимического определения гликогена в лейкоцитах

Позвонить Позвонить
Заказать

Производитель «НПФ АБРИС+»

Получить консультацию

Состав набора:
йодная кислота - 6 фл, реактив Шиффа - 1 фл, гематоксилин Майера - 1 фл.

Описание
Проведение анализа
РУ

Набор реагентов для выявления гликогена в клеточных элементах. Используется для диагностики острых лейкозов и служит маркерной реакцией для диагностики лимфолейкозов.

Механизм ПАС-реакции основан на окислении йодной кислотой гликолевых групп или их амино- или алкиламинопроизводных до альдегидов. Альдегидные группировки при взаимодействии с реактивом Шиффа образуют соединение красного цвета.

Исследуемый материал: мазки крови, костного мозга, лейкоконцентрат, спинномозговая жидкость, аспираты лимфоузлов, селезенки, лейкозные инфильтраты разной локализации

Кат №453 - 6 определений

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ:

Приготовление мазков: 2-3 мазка крови (или костного мозга) сделать на предметных стеклах с помощью более узкого предметного шлифованного стекла следующим образом.

На сухое предметное стекло, ближе к короткой стороне наносят пипеткой небольшую каплю крови. Предметное стекло следует держать на столе или в левой руке за узкие края. Правой рукой приставить шлифованное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45 и продвинуть его вправо до соприкосновения с каплей крови. Выждать до тех пор, пока кровь расплывется по всему ребру шлифованного стекла, и затем легким быстрым движением провести его справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой и соразмерна так, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1 - 1,5 см до его края. Нельзя сильно нажимать на стекло, так как многие клетки крови могут оказаться поврежденными. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается “метелочкой”. После приготовления мазки следует быстро высушить на воздухе до исчезновения влажного блеска. При медленном высыхании может изменяться морфология клеток.

Фиксация препаратов: приготовленные препараты положить на лотки, выстланные фильтровальной бумагой и высушить при комнатной температуре в течение 15 – 30 минут. Высушенный на воздухе препарат зафиксировать в спирт-формалиновой смеси в течение 10 минут, после чего промыть проточной водой в течение 10 секунд.

Приготовление рабочего раствора йодной кислоты: содержимое флакона с йодной кислотой растворить в 50 мл дистиллированной воды. Раствор сохраняет свои свойства в течение 3 месяцев при условии хранения в темном месте.

Реагенты готовые к применению:
- реактив Шиффа
- гематоксилин Майера

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Окраска препаратов.

1. Предметные стекла с зафиксированными препаратами поместить на штатив для окраски;

2. Налить на них рабочий раствор йодной кислоты. Оставить на 10 минут при комнатной температуре;

3.     Промыть дистиллированной водой 10 секунд;
4.     Промокнуть фильтровальной бумагой;
5.     Поместить в реактив Шиффа на 30 минут;
Примечание: с помощью пинцета, осторожно! Реактив слить назад, не загрязнять! Реактив Шиффа хранится в плотно закрытой бутылке из темного стекла при температуре 4ºС. За полчаса до применения – вынуть из холодильника.
6.     Промыть препараты в проточной воде 5 минут;
7.     Докрасить гематоксилином Майера 15-20 минут (время окраски подбирается эмпирически);
8.     Промыть стекла в проточной воде 10 секунд;
9.     Высушить окрашенный препарат на воздухе при комнатной температуре в вертикальном или наклонном положении;
10. Микроскопировать с иммерсионной системой.

Результат окраски: гликоген в лейкоцитах дает положительную реакцию в виде красного или красно-вишневого окрашивания.

Оценка результатов цитохимических реакций.

При цитохимических реакциях необходимо определить характер цитохимических реакций – слабая, умеренная, интенсивная, с указанием процента положительно реагирующих клеток.

С этой целью применяют полуколичественный метод оценки результатов в условных единицах или вычислением среднего цитохимического коэффициента (СЦК). Принцип его заключается в оценке интенсивности окраски и числа положительных гранул при анализе 100 клеток:

0- отсуствие окраски цитоплазмы расценивается как отрицательная реакция;
+ - слабодиффузное окрашивание или единичные гранулы в цитоплазме;
++ - диффузная окраска цитоплазмы, наличие умеренного числа гранул;
+++ - интенсивное окрашивание цитоплазмы, многочисленные гранулы, заполняющие всю клетку.

После оценки интенсивности окраски цитохимической реакции проводят расчет результатов в условных единицах или СЦК.

Вычисление среднего цитохимического коэффициента по формуле Astaldi и Verga: 3хС+2хВ+А

Оценка результатов в условных единицах по методике Karlow:
СЦК = (3хС+2хВ+А) / 100, где

А – количество клеток со слабоположительной реакцией;
В – количество клеток с умеренно положительной реакцией;
С – количество клеток с резко выраженной реакцией.

При этом показатель активности реакций в условных единицах может колебаться от 0 до 300, а СЦК – от 0 до 3%

71-1-ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-ПАС.jpg 71-2-ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-ПАС.jpg