Набор реагентов для иммуноферментного определения нуклеокапсидного антигена SARS-CoV-2 в биологических жидкостях «CoviNAg-ИФА»

Принцип работы набора

Определение нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 в биологических жидкостях основано на использовании «сэндвич»-варианта твердофазного иммуноферментного анализа. На внутренней поверхности лунок планшета иммобилизованы моноклональные антитела против нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2. Антиген из образца связывается с антителами на поверхности лунки и одновременно с другими антителами к тому же антигену, конъюгированными с пероксидазой хрена. В результате образуется связанный с пластиком комплекс, содержащий пероксидазу. Во время инкубации с субстратным раствором тетраметилбензидина (ТМБ) происходит окрашивание растворов в лунках.

Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 в исследуемом образце биологической жидкости. Концентрация нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 в биологических жидкостях рассчитывается по калибровочному графику зависимости оптической плотности от содержания нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 в калибровочных пробах.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

1.      Аналитическая специфичность

Перекрестная реактивность пары антител оценена по результатам испытаний на рекомбинантных нуклеокапсидных антигенов вирусов SARS-CoV и MERS-CoV.

Ни одна из испытанных проб не показала наличие перекрёстной реактивности.

Перекрестная реактивность к образцам, положительным для следующих патогенов, была проверена и доказана отрицательной: грипп А, грипп В, респираторносинцитиальный вирус (РСВ), аденовирус, риновирус, вирус парагриппа, метапневмовирус, энтеровирус, коронавирусы (HKU1, 229E, OC43, NL63), Streptococcus pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumanii, Nocardia asteroides, Moraxella catarrhalis, Legionella pneumophila, Mycoplasma pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Aspergillus niger.

Тесты на перекрестную реактивность были проведены на Staphylococcus aureus и признаны положительными при высоких концентрациях бактерий (109 КОЕ/мл). При тестировании носоглоточной пробы у пациентов, инфицированных Staphylococcus aureus (n = 15), ложноположительных результатов получено не было.

2.      Воспроизводимость

Коэффициент вариации определения нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 в одном и том же образце биологической жидкости с использованием Набора реагентов «CoviNAg-ИФА» не превышает 8,0%.

3.      Линейность

Зависимость концентрации нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 в образцах биологической жидкости при разведении их сывороткой (плазмой) крови, не содержащей нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2, имеет линейный характер в диапазоне концентраций С2-С5 и составляет 90-110%.

4.      Точность

Данный аналитический параметр проверяется тестом на «открытие» – соответствие измеренной концентрации нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 предписанной, полученной путем смешивания равных объемов контрольного образца и калибровочной пробы С3. Процент «открытия» составляет   90-110%.

5.      Аналитическая чувствительность

Минимальная достоверно определяемая Набором «CoviNAg-ИФА» концентрация нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 в биологических жидкостях не превышает                         5,0 пг/мл.

6.      Интерференция

На результаты анализа не оказывало влияния использование антикоагулянта цитрата натрия, ЭДТА, а также присутствие гемоглобина, триглицеридов, холестерина, билирубина и общего белка в концентрациях, не превышающих нормальные клинические значения в образцах в сыворотки и плазмы крови. Вещества, присутствующие в респираторных образцах естественным образом или вещества, которые могут попасть в полость носа и носоглотку искусственным путем, цельная кровь (1% объема) также не приводила к интерференции при интерпретации.

7. Референсные значения

Основываясь на результатах исследований, рекомендуем пользоваться нормами, приведенными ниже. Вместе с тем, в соответствии с правилами GLP (Good Laboratory Practice, Надлежащая Лабораторная практика), каждая лаборатория должна сама определить параметры нормы, характерные для обследуемой популяции.

Отрицательный результат, (пг/мл) < 20

Неопределённый результат, (пг/мл) 20-40

Положительный результат, (пг/мл) > 40

Образцы с неопределенным результатом следует исследовать повторно в двух лунках. При получении положительного результата хотя бы в одной лунке образцы считать положительными.

Примечание. Значения концентраций нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 в исследуемых образцах, находящиеся ниже границы чувствительности Набора (5,0 пг/мл) следует приводить в следующей форме: в исследуемом образце (Х) концентрация нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 ниже 5,0 пг/мл.

8. Хук-эффект

Вероятность   Хук-эффекта   исследовалась   путем   тестирования   образцов   с   высокой концентрацией нуклеокапсидного антигена вируса SARS-CoV-2 и их разведения. Идентичность результатов неразведенных и разведенных образцов указывает на отсутствие Хук-эффекта до концентрации 10 000 пг/мл.

Транспортировка - при температуре +2-8°С. Допускается транспортировка набора при температуре до +25°С не более 15 суток.

Хранение - при температуре +2–8 °C в течение всего срока годности, указанного на упаковке.

Допускается хранение набора при температуре до +25°С не более 15 суток.

Не допускается замораживание целого набора.

Срок годности набора - 18 месяцев.