8 800 333 73 24БЕСПЛАТНО ПО РОССИИ

ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН - СЧ Определения фосфолипидов в лейкоцитах

Консультант раздела:

Продакт-менеджер по клинической лабораторной диагностике

Тел.: (812) 740-16-45 доб.760
E-mail: AkayaEN@abrisplus.ru

Консультант раздела:

Специалист по гематологии, цитологии и цитохимии (продукция производства НПФ «АБРИС+») Михалевич Юлиана Николаевна

Тел.: (812) 740-16-46 доб.771
E-mail: MihalevichYUN@abrisplus.ru
Предыдущий товар

ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-ЩФ Определение щелочной фосфатазы в лейкоцитах

Следующий товар

ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-МПО Определение миелопероксидазы в лейкоцитах

ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН - СЧ Набор реагентов для определения фосфолипидов в лейкоцитах

Позвонить Позвонить
Заказать

Производитель «НПФ АБРИС+»

Получить консультацию

Состав набора:

- судан черный В - 2 фл,
- карболовая кислота - 2 фл,
- фосфат натрия - 6 фл.

  • Описание
  • Проведение анализа
  • Регистрационные удостоверения

Набор реагентов для выявления фосфолипидов в клеточных элементах. Используется для диагностики острых лейкозов и служит маркерной реакцией для диагностики миелолейкозов, вместе с реакцией на миелопероксидазу.

Принцип метода: основным компонентом жировых веществ в гемопоэтических клетках являются фосфолипиды (фосфорсодержащие сложные эфиры глицерина). Они являются составной частью структур цитоплазматической сети, пластинчатого комплекса и используются в качестве энергетического и пластического материала. Выявление фосфолипидов основано на применении липофильных красителей, растворяющихся и избирательно концентрирующихся во внутриклеточных липидах

Исследуемый материал: кровь, костный мозг

Кат №455 - 12 определений

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ:

Приготовление мазков: 2-3 мазка крови (или костного мозга) сделать на предметных стеклах с помощью более узкого предметного шлифованного стекла следующим образом.

На сухое предметное стекло, ближе к короткой стороне наносят пипеткой небольшую каплю крови. Предметное стекло следует держать на столе или в левой руке за узкие края. Правой рукой приставить шлифованное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45° и продвинуть его вправо до соприкосновения с каплей крови. Выждать до тех пор, пока кровь расплывется по всему ребру шлифованного стекла, и затем легким быстрым движением провести его справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой и соразмерна так, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1 - 1,5 см до его края. Нельзя сильно нажимать на стекло, так как многие клетки крови могут оказаться поврежденными. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается “метелочкой”. После приготовления мазки следует быстро высушить на воздухе до исчезновения влажного блеска. При медленном высыхании может изменяться морфология клеток. Затем надо уложить предметные стекла мазками кверху на стеклянный мостик для окраски.

Фиксация препаратов: приготовленные препараты положить на лотки, выстланные фильтровальной бумагой и высушить при комнатной температуре в течение 15 – 30 минут. Высушенный на воздухе препарат зафиксировать в парах формалина при температуре 37° в течение 10 минут, после чего промыть проточной водой не менее 10 секунд

Приготовление буферного раствора: растворить навеску фосфата натрия в 25 мл дистиллированной воды. Отмерить 7,5 мл раствора карболовой кислоты. Соединить с 25 мл раствора фосфата натрия. Раствор сохраняет свои свойства в течение 3 месяцев при температуре 0 - +4°С.

Приготовление рабочего раствора судана черного: к 30 мл раствора судана черного В добавить 20 мл буферного раствора.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

1.    Предметные стёкла с зафиксированными препаратами поместить на штатив для окраски и на них налить свежеприготовленный рабочий раствор;
2.     Выдержать 60 минут при комнатной температуре;
3.     Ополоснуть в 70° этаноле 3 сек;
4.     Промыть дистиллированной водой в течение 5 секунд;
5.     Промокнуть фильтровальной бумагой;
6.     Докрасить раствором красителя Диахим-ГемиСтейн-Р («Профессионал»)- по Романовскому 15-20 мин;
7.     Промыть в проточной воде 10 секунд;
8.     Высушить на воздухе при комнатной температуре в вертикальном или наклонном положении;
9.     Микроскопировать с иммерсионной системой.

Результаты:

Фосфолипиды дают положительную реакцию в виде черного или черно-коричневого окрашивания, не растворимого в воде.

Нормальные величины:

Большинство нейтрофилов (69-80%) у здоровых людей красятся интенсивно, 18-36% дают окраску средней интенсивности и 10% слабо окрашены.

СЦК в нейтрофилах 2,65-0,033.

Фосфолипиды обнаруживаются в виде коричнево-черных гранул в клетках гранулоцитарного ряда, начиная со стадии миелобласта. Наиболее богаты липидами зрелые гранулоциты, в цитоплазме которых липиды (суданофильный материал) расположена в основном в перинуклеарной зоне. В моноцитах редкие суданофильные гранулы рассеяны по всей цитоплазме.

В эозинофилах суданоположительное вещество локализуется по периферии специфических гранул, с неокрашенной центральной зоной, реакция в базофилах вариабильна.

Лимфоциты и их предшественники реагируют отрицательно. Также отрицательно реагируют тромбоциты и мегакариоциты и эритробласты. Мегакариоциты изредка могут демонстрировать диффузное окрашивание, на фоне которого рассеяны очень мелкие суданофильные гранулы в цитоплазме и над ядром.

Изменения при патологических состояниях:

Липиды являются более чувствительным маркером миелоидной дифференцировки. В соответствии с ФАБ-классификацией критериями диагностики острых лейкозов для подтверждения миелоидной природы бластов необходимо выявление 3% и более бластных клеток, положительных по липидам.

Оценка результатов цитохимических реакций.

При цитохимических реакциях необходимо определить характер цитохимических реакций – слабая, умеренная, интенсивная, с указанием процента положительно реагирующих клеток.
С этой целью применяют полуколичественный метод оценки результатов в условных единицах или вычислением среднего цитохимического коэффициента (СЦК). Принцип его заключается в оценке интенсивности окраски и числа положительных гранул при анализе 100 клеток:
0- отсуствие окраски цитоплазмы расценивается как отрицательная реакция;
+ - слабодиффузное окрашивание или единичные гранулы в цитоплазме;
++ - диффузная окраска цитоплазмы, наличие умеренного числа гранул;
+++ - интенсивное окрашивание цитоплазмы, многочисленные гранулы, заполняющие всю клетку.

После оценки интенсивности окраски цитохимической реакции проводят расчет результатов в условных единицах или СЦК.

Вычисление среднего цитохимического коэффициента по формуле Astaldi и Verga: 3хС+2хВ+А

Оценка результатов в условных единицах по методике Karlow:
СЦК = (3хС+2хВ+А) / 100, где
А – количество клеток со слабоположительной реакцией;
В – количество клеток с умеренно положительной реакцией;
С – количество клеток с резко выраженной реакцией.

При этом показатель активности реакций в условных единицах может колебаться от 0 до 300, а СЦК – от 0 до 3%

67-2-ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-СЧ.jpg
67-1-ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-СЧ.jpg


ВОПРОСЫ-ОТВЕТЫ

Вопрос:
Можно ли разводить краситель по Романовскому 1:5 ?

Подробнее

СТАТЬИ

Цитохимические исследования эритроцитов

Авторы:
Зенина М.Н. Ассистент кафедры КЛД СЗГМУ им.И.И.Мечникова
Черныш Н.Ю. Доцент кафедры лабораторной медицины и генетики НМИЦ им.В.А.Алмазова

Читать далее

ОТЗЫВЫ

Отзыв о работе автомата окраски мазков крови "АвтоОМК", производства ЗАО "Солар", с использованием наборов красителей производства ООО НПФ "АБРИС+"

Читать далее


НАШИ ПАРТНЕРЫ:

Войти в систему