ДИАХИМ - Набор реагентов для клинического анализа кала

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ:

Приготовление каловой эмульсии: небольшое количество кала (размером с лесной орех) поместить в стеклянную пробирку и, постепенно добавляя дистиллированную воду, растереть стеклянной палочкой до консистенции «густого сиропа» (разведение 1:6 – 1:10).

Приготовление 3% раствора перекиси водорода: в колбу коническую вместимостью 100 мл внести 4,5г (3 таблетки) гидроперита, добавить 50 мл дистиллированной воды и тщательно перемешать до полного растворения. Раствор стабилен при хранении в посуде из темного стекла и температуре 2-8°С в течение 3 месяцев.

Приготовление раствора бензидина: около 0,05г бензидина (количество, сопоставимое по размерам с крупной горошиной) внести во флакон из темного стекла вместимостью 10 мл, добавить 5,0 мл 50% раствора уксусной кислоты и тщательно перемешать до полного растворения.

Раствор бензидина готовят непосредственно перед применением; хранению не подлежит.

Приготовление рабочего раствора Люголя: разбавить раствор Люголя дистиллированной водой в соотношении 1:1. Рабочий раствор Люголя можно хранить при комнатной температуре в защищенном от света месте не более 6 месяцев.

Приготовление 0,5% раствора метиленового синего: перед использованием раствор метиленового синего разбавить дистиллированной водой в соотношении 1:3. После вскрытия флакона раствор можно хранить при комнатной температуре (18-25°С) в плотно закрытом флаконе не более 1 года.

Цинк уксуснокислый: готов к применению. Перед применением взболтать. После вскрытия флакона раствор можно хранить при комнатной температуре (18-25°С) в плотно закрытом флаконе не более 1 года.

Реактив Фуше: готов к применению. Перед применением взболтать. После вскрытия флакона раствор можно хранить при комнатной температуре (18-25°С) в плотно закрытом флаконе не более 1 года.

Судан III раствор: готов к применению. После вскрытия флакона раствор можно хранить при комнатной температуре (18-25°С) в плотно закрытом флаконе не более 1 года.

Глицерин: готов к применению. После вскрытия флакона раствор можно хранить при комнатной температуре (18-25°С) в плотно закрытом флаконе не более 1 года.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

1. Микроскопическое исследование.

Для микроскопического исследования кала готовят не менее 6 препаратов:

- нативный неокрашенный препарат;
- препарат с суданом III;
- препарат с метиленовым синим;
- препарат с 30% раствором уксусной кислоты;
- препарат с раствором Люголя;
- препарат с глицерином.

При приготовлении каждого из них:

1.     На предметное стекло стеклянной палочкой нанести 1-2 капли эмульсии кала или жидкой каловой массы;
2.     В препараты 2-6 внести 1-2 капли соответствующего реактива;
3.     Каплю эмульсии краем покровного стекла смешать с каплей реактива;
4.     Покрыть покровным стеклом и рассматривать сначала под малым (8х10), а затем под большим (40х10) увеличением.

При неоднородности каловых масс препараты следует готовить из макроскопически видимых плотных частиц и из жидкой части.

2. Исследование нативного препарата.

В нативном препарате можно обнаружить большинство элементов кала: мышечные волокна (переваренные, непереваренные и слабопереваренные), растительную клетчатку (переваримую и непереваримую) нейтральный жир в виде бесцветных капель, жирные кислоты в виде капель, игольчатых кристаллов и глыбок, мыла – в виде кристаллов, игл и глыбок, лейкоциты, эритроциты, кишечный эпителий, слизь, яйца гельминтов, паразитирующие в кишечнике простейшие, микроорганизмы, кристаллы. Для получения достоверного результата исследования при обнаружении в нативном неокрашенном препарате любых видов жиров и яиц гельминтов необходимы дополнительные исследования.

3. Определение скрытой крови.

1.     Кал стеклянной палочкой нанести в виде мазка на предметное стекло (или взять 2-3 капли эмульсии кала);
2.     Стекло с нанесенным материалом поместить в белую эмалированную кювету или на белую керамическую плитку;
3.     К препарату добавить 2-3 капли раствора бензидина;
4.     Добавить 2-3 капли 3% раствора перекиси водорода;
5.     Перемешать стеклянной палочкой.

Появление зеленого, сине-зеленого или синего окрашивания в течение первых 2 минут после смешивания реагентов указывает на наличие в кале крови (положительная реакция). Появление окраски в более позднее время не учитывается (отрицательная реакция).

4. Определение билирубина.

1.     Эмульсию кала 1-2 мл поместить в 2 пробирки (опыт и контроль);
2.     В опытную пробирку добавить по каплям реактив Фуше (объем реактива не должен быть больше эмульсии кала).

В присутствии билирубина появляется зеленое или зеленоватое окрашивание (положительная реакция).

Примечание: при проведении анализа обе пробирки держать в руке. Сравнивать окраску в опытной пробирке с контрольной в проходящем свете.

5. Определение стеркобилина.

1.     Внести в пробирку 1-2 мл эмульсии кала;
2.     Добавить равное количество раствора уксуснокислого цинка (предварительно взболтать);
3.     Добавить 1 каплю рабочего раствора Люголя;
4.     Смесь профильтровать в стеклянную пробирку.

При наличии стеркобилина (положительная реакция) раствор дает зеленую флюоресценцию, видную на темном фоне.

6. Определение окраски жира и жирных кислот с суданом III.

1.     На предметное стекло стеклянной палочкой нанести 1-2 капли эмульсии кала или жидкой каловой массы;
2.     Внести в препарат 1-2 капли раствора судана III;
3.     Эмульсию и реактив смешать краем покровного стекла;
4.     Рассматривать сначала под малым (8х10), а затем под большим (40х10) увеличением.

Капли нейтрального жира и капли жирных кислот окрашиваются в оранжевый цвет. Нагревание такого препарата ведет к расщеплению мыл (если они есть) и образованию капель жирных кислот, которые также окрашиваются в оранжевый цвет.

7. Определение окраски жира с метиленовым синим.

При обнаружении жира в виде капель микроскопируют препарат с метиленовым синим.

1.     На предметное стекло стеклянной палочкой нанести 1-2 капли эмульсии кала или жидкой каловой массы;
2.     Внести в препарат 1-2 капли раствора метиленового синего (0,5%);
3.     Эмульсию и реактив смешать краем покровного стекла;
4.     Рассматривать сначала под малым (8х10), а затем под большим (40х10) увеличением.

Капли нейтрального жира бесцветны, капли жирных кислот окрашены в голубой или синий цвет.

8. Выявление яиц гельминтов с глицерином.

1. На предметное стекло стеклянной палочкой нанести 1-2 капли эмульсии кала или жидкой каловой массы;
2. Внести в препарат 1-2 капли глицерина;
3. Эмульсию и реактив смешать краем покровного стекла;
4. Рассматривать сначала под малым (8х10), а затем под большим (40х10) увеличением.

Глицерин очищает от бактерий и калового детрита яйца гельминтов, «просветляет» препарат и помогает установить принадлежность обнаруженных яиц. При обнаружении яиц гельминтов необходимо провести специальное исследование по Като.

9. Исследование кала с нагреванием.

При обнаружении глыбок и игл в нативном препарате. Дифференцирует жирные кислоты от мыл.

Нативный препарат подогревают (не доводя до кипения) и тотчас микроскопируют. Образование капель после нагревания указывает на наличие жирных кислот, при остывании препарата капли вновь превращаются в глыбки (препарат можно подогреть повторно). Если при нагревании капель не образовалось, а иглы и глыбки остаются, нагревают препарат с уксусной кислотой.

10. Исследование с 30% раствором уксусной кислоты.

Глыбки и кристаллы мыл сплавляются в капли после нагрева (до кипения) препарата с уксусной кислотой. Уксусная кислота расщепляет мыла и освобождает жирные кислоты, которые плавятся, образуя капли.

Читать далее