8 800 333 73 24БЕСПЛАТНО ПО РОССИИ

ДИАХИМ- Набор реагентов для клинического анализа мокроты

Консультант раздела:

Специалист по гематологии, цитологии и цитохимии (продукция производства НПФ «АБРИС+») Михалевич Юлиана Николаевна

Тел.: (812) 740-16-46 доб.771
E-mail: MihalevichYUN@abrisplus.ru

Консультант раздела:

Служба качества

Тел.: (812) 740-16-80
E-mail: ZverevaAV@abrisplus.ru
Предыдущий товар

ДИАХИМ - СК Определение скрытой крови в кале

Следующий товар

ДИАХИМ-ДИФФ-КВИК Быстрое дифференцированное окрашивание биопрепаратов

ДИАХИМ- Набор реагентов для клинического анализа мокроты

Позвонить Позвонить
Заказать

Производитель «НПФ АБРИС+»

Получить консультацию

  • Описание
  • Проведение анализа
  • Регистрационные удостоверения

Набор реагентов для клинического анализа мокроты, предназначен для проведения микроскопического и бактериологического исследования мокроты в клинико-диагностических лабораториях, лечебно-профилактических учреждениях путем окраски препаратов, взятых из биологического материала человека.

Принцип метода:

Метод окраски кислотоустойчивых бактерий по Цилю-Нильсену основан на способности клеток различных микроорганизмов, предварительно фиксированных и окрашенных при прогревании основным фуксином Циля, прочно удерживать окраску после обработки раствором минеральной кислоты. Кислотоустойчивость обусловлена особенностями химического состава клеточной стенки бактерий: высоким содержанием в ней сложных липидов и, в частности, наличием миколовых кислот.

Обнаружение альвеолярных макрофагов с гемосидерином. Аморфные кристаллы гемосидерина (окислы железа желтого цвета), расположенные внутриклеточно, при внесении в нативный препарат мокроты раствора калия железистосинеродистого и раствора соляной кислоты вступают в реакцию с образованием берлинской лазури - соединения, окрашенного в голубой или сине-зеленый цвет.

Обнаружение клеток, характерных для воспалительных и злокачественных процессов в легких. Метод основан на воздействии азур-эозиновых красителей типа Май-Грюнвальда и Романовского на клеточные элементы мокроты. Клетки приобретают различную окраску: ядра окрашиваются в темно-фиолетовый цвет; ядрышки - в голубой; цитоплазма, в зависимости от ее принадлежности к той или другой клетки, принимает соответствующую окраску от розовато-сероватого, бледно-голубого до синего.

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ:

Приготовление рабочего раствора солянокислого спирта:

Во флакон емкостью 200 мл внести солянокислый спирт (концентрат) (20 мл) и добавить 96º-го этилового спирта (180 мл), либо приготовить рабочий раствор солянокислого спирта в необходимом количестве из расчета 1:9 (концентрат: спирт). Раствор тщательно перемешать, хранить в закрытом состоянии в течение всего срока годности набора.

Приготовление буферного раствора с рН 6,8 – 7,2:

Фосфатный буфер (концентрат) развести в 3 л дистиллированной воды. Полученный раствор использовать для разведения красителя и промывки стекол. Хранить при температуре 18-25°С в течение всего срока годности набора.

Приготовление рабочего раствора Азур-эозина по Романовскому:

Смешать краситель Азур-эозин по Романовскому с буферным раствором в соотношении 1:10 – 1:12 в необходимом количестве перед применением. Рабочий раствор красителя азур-эозин по Романовскому стабилен при комнатной температуре в течение 8 часов.

Реагенты готовые к применению:

- карболовый фуксин по Цилю-Нильсену;
- метиленовый синий, 1 %;
- калий железистосинеродистый, 5 %;
- кислота соляная 5 %;
- краситель эозин-метиленовый синий по Май-Грюнвальду.

Реагенты можно хранить при комнатной температуре в плотно закрытых флаконах, в защищенном от света месте в течение всего срока годности набора.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

Приготовление препаратов из нативной мокроты:

Из разных участков образца мокроты выбрать 2-3 гнойных небольших комочка, перенести на новое (не поцарапанное) предметное стекло и с помощью уголка другого предметного стекла равномерно растереть тонким слоем ближе к одному или другому краю предметного стекла на площади размером приблизительно 2×2 или 1,5×2 см в виде круга или овала.

Примечание: При приготовлении препарата для микроскопического исследования необходимо добиться его правильной толщины. Слишком тонкий мазок содержит мало материала, что может привести к ложноотрицательному результату. Слишком толстый мазок трудно хорошо зафиксировать, окрасить. По окончании окраски материал, недостаточно плотно фиксированный на стекле, может быть частично или полностью смыт водой. Толстый препарат плохо просматривается при микроскопическом исследовании.

Не рекомендуется готовить препараты с помощью «растяжки» мокроты между двух предметных стекол или растирания мокроты между двух предметных стекол. Эти способы приготовления препаратов мокроты сопровождается образованием биологически опасного аэрозоля и загрязняют инфицированным материалом края предметных стёкол.

Фиксация мазков:

Приготовленные препараты положить на лотки, выстланные фильтровальной бумагой, и высушить при комнатной температуре в течение 15 – 30 минут. Высушенный на воздухе препарат зафиксировать над пламенем спиртовой или газовой горелки. Для этого стекло с сухим препаратом трижды медленно провести через верхнюю треть пламени до исчезновения признаков запотевания стекла. Общая продолжительность пребывания препарата в пламени не должна превышать 3 – 5 секунд. Не допускается фиксация над пламенем горелки сырых препаратов мокроты.

Определение окраски кислотоустойчивых микроорганизмов:

1.     Предметные стёкла с зафиксированными препаратами поместить на штатив для окраски так, чтобы расстояние между ними составляло примерно 1 см;
2.     На каждое стекло положить полоску фильтровальной бумаги так, чтобы она полностью закрывала только препарат. Это предотвращает в дальнейшем распределение краски по всему стеклу;
3.     Налить с помощью пипетки на бумагу с избытком раствор карболового фуксина по Цилю-Нильсену;
4.     Внести стекло с препаратом в пламя горелки и дождаться появления пара, что означает закипание на препарате мокроты карболового фуксина по Цилю-Нильсену;
5.     Повторить эту процедуру ещё раз;
Примечание: При подогревании препарата необходимо следить за тем, чтобы фильтровальная бумага, смоченная карболовым фуксином по Циль-Нильсену, оставалась влажной до конца третьей процедуры. При трёхкратном появлении пара над препаратом мокроты происходит стойкое прокрашивание липоидной оболочки КУМ
6.      Подогретый мазок оставить на 3-5 минут, чтобы краситель проник в клеточную систему микобактерий и окрасил её;
7.      Снять с помощью пинцета фильтровальную бумагу;
8.      Остатки краски осторожно смыть с обратной стороны предметного стекла слабой струёй холодной воды, пока не прекратится видимое отхождение фуксина;
9.      Стекло с препаратом вновь положить на «рельсы»;
10.   Покрыть полностью всю поверхность препарата солянокислым спиртом на 3 минуты, т.е. до полного обесцвечивания;
11.   Тщательно смыть солянокислый спирт холодной водой с обратной стороны предметного стекла;
12.   Залить препарат раствором метиленового синего на 1-2 минуты;
13.   Смыть метиленовую синь с препарата холодной водой с обратной стороны предметного стекла;
14.   Высушить окрашенный препарат на воздухе при комнатной температуре в вертикальном или наклонном положении;
Препарат не следует промокать фильтровальной бумагой.
15. Микроскопировать с иммерсионной системой.

Результаты окраски:

Оболочка КУМ окрашивается фуксином по Циль-Нильсену в малиново-красный цвет, а другие микроорганизмы и клеточные элементы обесцвечиваются серной кислотой и окрашиваются метиленовым синим - в голубой.

Градация результатов микроскопического исследования при окраске по методу Циль-Нильсена:

Результат

исследования

Число полей зрения (п/з), обязательных для просмотра

Интерпретация результата исследования

КУМ - не обнаружены

300

Отрицательный

КУМ - 1 - 2

300

Результат не оценивается, рекомендуется повторить исследование

КУМ - 1 - 9

100

Положительный, указывают точное число КУМ

КУМ - 10 - 90

100

Положительный - 1+ - единичные КУМ в поле зрения

КУМ - 1 - 10 в 1 п/з

50

Положительный - 2+ - умеренное количество КУМ

Более 10 КУМ в 1 п/з

20

Положительный - 3+ - значительное количество КУМ

Определение окраски альвеолярных макрофагов с гемосидерином:

С нативного препарата, в котором обнаружены альвеолярные макрофаги желтовато-коричневого цвета с единичными крупными и многочисленными мелкими включениями в цитоплазме, подозрительные на содержание в них аморфных кристаллов гемосидерина, осторожно, под контролем малого увеличения микроскопа, снять покровное стекло.

1.     На препарат нанести каплю раствора калия железистосинеродистого;

2.     Смешать с мокротой уголком покровного стекла или стеклянной палочкой;

3.     Добавить такую же по размеру каплю соляной кислоты;

4.     Смешать и накрыть препарат покровным стеклом;

5.     Выдержать 10-15 мин;

6.     Микроскопировать при малом увеличении;

Результаты окраски:

Аморфные кристаллы гемосидерина, расположенные внутриклеточно, при внесении в нативный препарат мокроты раствора железистосинеродистого калия и раствора соляной кислоты вступают в реакцию с образованием берлинской лазури – соединения, окрашенного в голубой или сине-зеленый цвет.

Обнаружение клеточных элементов, характерных для воспалительных и злокачественных новообразований:

Нативные препараты мокроты фиксируют фиксатором-красителем эозин-метиленовым синим по Май-Грюнвальду, а затем докрашивают рабочим раствором азур-эозин по Романовскому.

1.     На препарат, высушенный на воздухе, налить фиксатор по Май-Грюнвальду так, чтобы он покрыл все стекло (1-1,5мл) или опустить в емкость с фиксатором по Май-Грюнвальду, выдержать в течение 2-3 минут;

2.     Фиксатор смыть слабой струёй воды с обратной стороны предметного стекла с препаратом мокроты;

3.     Стекло с зафиксированным препаратом мокроты положить на «рельсы»;

4.     Налить рабочий раствор красителя азур-эозин по Романовскому (2-2,5 мл) так, чтобы он покрыл весь мазок или опустить в емкость для окраски препаратов.

Время окраски препаратов подобрать предварительно на нескольких фиксированных мазках: экссудат – 7-10 минут, мокрота – 30-40 минут.

5.     Краску с препарата слить;

6.     Промыть препарат водопроводной холодной водой, направляя её на обратную сторону предметного стекла;

7.     Препарат высушить на воздухе;

Микроскопировать с иммерсионной системой;

Результаты окраски:

  • ядра лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов - фиолетовые;

  • цитоплазма лимфоцитов - голубая, серо-голубая или сине-голубая;

  • цитоплазма моноцитов - серо-голубая;

  • цитоплазма нейтрофилов - бледно-розовая или розово-серая;

  • зернистость нейтрофилов - фиолетовая или красно-фиолетовая;

  • зернистость эозинофилов - оранжево-красная, розово-красная или розово-фиолетовая;

  • зернистость базофилов - фиолетовая

Клетки злокачественных новообразований – морфологию этих клеток определить по руководству по цитологии (полиморфизм их размеров, нарушение ядерно-цитоплазматического соотношения в сторону увеличения ядра, изменение формы ядра, наличие в нём множественных ядрышек неправильной формы, митоз клеток).

Клетки воспаления - альвеолярные макрофаги («пылевые клетки»), макрофаги с миелином, гистиоциты, моноциты, эозинофилы, цилиндрический эпителий и др. Морфологию этих клеток и образований определить по руководству по гематологии и цитологии.






41-1-Диахим-Набор реагентов для кл.анализа мокроты.jpg
41-2-Диахим-Набор реагентов для кл.анализа мокроты.jpg



ВОПРОСЫ-ОТВЕТЫ

Вопрос:
Можно ли разводить краситель по Романовскому 1:5 ?

Подробнее

СТАТЬИ

Цитохимические исследования эритроцитов

Авторы:
Зенина М.Н. Ассистент кафедры КЛД СЗГМУ им.И.И.Мечникова
Черныш Н.Ю. Доцент кафедры лабораторной медицины и генетики НМИЦ им.В.А.Алмазова

Читать далее

ОТЗЫВЫ

Отзыв о наборе Цито-ПАП Окраска по Папаниколау:

Цитологическая лаборатория б-цы Петра Великого Университета Мечникова, г.Санкт-Петербург

Читать далее


НАШИ ПАРТНЕРЫ:

Войти в систему